国产全自动HIV-1 核酸定量检测试剂盒的性能评(2)

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摘要：2.3 对照试验定性结果分析 分别采用国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂检测210例样本，检测结果均为阳性的有164例，均为阴性的有46例，2种试剂定性结果的符

2.3 对照试验定性结果分析

分别采用国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂检测210例样本，检测结果均为阳性的有164例，均为阴性的有46例，2种试剂定性结果的符合率均为100.00%，定性结果一致（Kappa值=1.00）。见表4。

2.4 对照试验定量结果分析

将164例阳性样本检测结果以lg函数转换成对数值，评价定量结果的相关性。线性回归分析结果显示，2种试剂检测HIV-1载量的相关性良好（r=0.953），见图1。2种试剂之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表4 2种试剂定性结果的一致性比较例（%）

图1 国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂的相关性分析注：Y=0.921X+0.281（r=0.953）

由于核酸定量试剂在最低检测限和最低定量限区域内的检测结果可能会出现偏差，所以根据低病毒血症的HIV-1载量（50～1 000拷贝/mL），并结合国内外试剂的检测限和定量限，将定量检测结果的低值区域定为20～1 000拷贝/mL。164例阳性样本中低值样本为31例。对2种试剂检测低值样本的结果进行相关性分析，结果显示相关性较好（r=0.823）。

3 讨论

本研究使用的DYSW-AUTO48全自动液体处理工作站采用纳米磁珠分离技术从样本中分离、纯化核酸。从加样开始，全自动完成样本裂解、核酸吸附、清洗、洗脱和试剂配置，无需人工干预，有效避免了人为因素的干扰，还能减少操作人员与临床样本的接触，降低生物安全风险，且成本较低、操作简便。

本研究结果显示，国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂的检测符合率为100.00%，相关性良好（r=0.953），低值样本的相关性也较好（r=0.823），由此说明国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂检测结果的一致性良好。国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度为50 IU/mL（约30拷贝/mL），样本用量较少（400 μL），与厂商声明（检测下限为50 IU/ml）一致。由于部分HIV-1感染者在抗病毒治疗过程中会出现持续性低病毒血症，病毒载量为50～1 000拷贝/mL，与耐药发生、病毒学检测失败、持续性炎症、微生物移位、高死亡率等密切相关[10]，所以HIV检测试剂的高灵敏度性能具有重要的临床意义。

综上所述，国产NEPG HIV-1试剂可以满足临床应用要求，检测成本较低，检测性能与进口HIV-1试剂相当，可用于HIV-1感染的早期诊断、疑难样本的辅助诊断及AIDS的病情监测等。

[1]李繁，蒋岩，王天怡，等.某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估[J].中华疾病控制杂志，2013，17（7）：605-608.

[2]王倩，杨志东，崔晨，等.免疫渗滤法检测血液及尿液HIV抗体的应用评价[J].微生物学杂志，2014，34（3）：71-73.

[3]李书平，付雪梅，王乃红，等.第四代人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂特异性及灵敏度的比较及其意义[J].四川医学，2012，33（6）：1069-1071.

[4]李梅，王静.某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估[J].检验医学与临床，2014，11（16）：2220-2221.

[5]欧阳金鸣，韩晓旭，吉阳涛，等.三种不同技术原理的第4代HIV诊断试剂的临床检测性能比较研究[J].中华检验医学杂志，2013，36（10）：903-907.

[6]李玉文.两种HIV抗体初筛试剂盒阳性率的比较分析[J].世界临床医学，2016，10（15）：7.

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[10]RYSCAVAGE P，KELLY S，LI J Z，et and clinical management of persistence low-level viremia and very-low-level viremia in HIV-1-infected patients[J].Antimicrob Agents Chemother，2014，58（7）：3585-3598.

获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的一种免疫缺陷性疾病[1]，治疗困难极大，极易引起多种并发症，最终导致患者死亡[2]。因此，如何有效控制AIDS流行是目前医学界面临的难题。由于目前还没有能有效治疗AIDS及预防HIV感染的药物，因此现在只能通过早期筛查，查找传染源，从根本上切断HIV的传播途径，以有效避免AIDS的传播[3]。HIV抗体检测是诊断HIV感染的首选方法。HIV核酸检测可作为辅助检查手段使用，可用于HIV感染过程、病情进展及药物疗效的评估[4]。人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）核酸检测方法能够定量检测患者的HIV-1载量，准确反映体内病毒含量，对于疾病诊断及疗效评估具有重要意义[5]。虽然HIV-1核酸定量检测试剂早已用于临床，但大部分试剂为进口，价格昂贵，而且需要昂贵的仪器设备，导致检测费用居高不下，难以在基层医院及基层疾病控制中心推广[6-7]。因此，开发检测性能与进口试剂盒相当的国产试剂盒迫在眉睫[8]。目前，国内已有厂商自主研发了一些HIV-1核酸定量检测试剂盒，并用于临床检测，但准确性、敏感性尚不明确。本研究拟对国产全自动HIV核酸检测试剂的主要性能进行评估，并与进口试剂进行比对，探讨其临床应用的可行性。1 材料和方法1.1 样本收集巴中市疾病预防控制中心2018年2—5月210例临床样本，其中男127例、女83例，年龄15～68岁。感染HIV-1的样本190例，非HIV-1感染样本20例。所有样本均采用乙二胺四乙酸二钾抗凝，1 000×g离心15 min，吸取上层血浆待测。所有样本均无重度溶血、变质及反复冻融等情?仪器与试剂灵敏度/定量参考品（HIV-1 RNA为 4.04×105IU/mL）及参考品稀释液购自中国食品药品检定研究院（批号22）。DYSW-AUTO48全自动液体处理工作站及Line-Gene 9600 Plus实时荧光定量PCR检测系统均购自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。cobas AmpliPrep/cobas Taq-Man全自动核酸提取纯化及实时荧光定量PCR检测系统购自瑞士罗氏公司。待测试剂为NEPG全自动HIV-1核酸定量检测试剂盒（简称国产NEPG HIV-1试剂，批号），购自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。参比试剂为cobas AmpliPrep cobas TaqMan HIV-1 Test v2.0试剂盒（简称进口HIV-1试剂，批号Y06193），购自瑞士Roche公司。2种试剂盒的技术参数见表1。表1 国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂的技术参数注：RT-PCR为逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction）1.3 方法1.3.1 准确性 将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释成低（5.0×102IU/mL）、中（5.0×103IU/mL）、高（5.0×104IU/mL）3个浓度，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3次，计算均值。将检测结果用lg函数转换成对数值。绝对偏差=测定结果均值的对数值-预期值的对数值。根据我国医药行业标准YY/T 1182—2010中的要求，靖龆允?灵敏度 将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释至200、100、50、25 IU/mL，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3次，计算?对照试验 分别采用待测试剂和参比试剂双盲检测同份一血浆样本，评价2种试剂的符合率和一致性。待测试剂的定性结果判断：如果扩增曲线不呈现S型曲线或循环阈值（cycle threshold，Ct）为0，同时内标检测为阳性，报告为HIV-1 RNA阴性；除此之外，其他情况加上内标检测为阳性均判定为HIV-1 单位换算 根据基于核酸技术的HIV-1 RNA世界卫生组织第1代国际标准品（NIBSC 97/656）[9]，1拷贝/mL相当于1.67 IU/ 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以±s表示，组间比较采用配对t检验。采用Kappa检验评价2种试剂定性结果的一致性。采用线性回归分析评价2种试剂定量结果的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 准确性分析低、中、高浓度样本测定结果的绝对偏差分别为0.05、0.08、-0.06，均符合要求。见表2。表2 国产NEPG HIV-1试剂的准确性2.2 灵敏度分析浓度为200、100、50 IU/mL的样本各检测3次，结果均为阳性。浓度为25 IU/mL的样本检测3次，有1次未检出。因此，国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度为50 IU/mL（约30 拷贝/mL）。见表3。表3 国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度2.3 对照试验定性结果分析分别采用国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂检测210例样本，检测结果均为阳性的有164例，均为阴性的有46例，2种试剂定性结果的符合率均为100.00%，定性结果一致（Kappa值=1. 对照试验定量结果分析将164例阳性样本检测结果以lg函数转换成对数值，评价定量结果的相关性。线性回归分析结果显示，2种试剂检测HIV-1载量的相关性良好（r=0.953），见图1。2种试剂之间差异无统计学意义（P＞0.05）。表4 2种试剂定性结果的一致性比较例（%）图1 国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂的相关性分析注：Y=0.921X+0.281（r=0.953）由于核酸定量试剂在最低检测限和最低定量限区域内的检测结果可能会出现偏差，所以根据低病毒血症的HIV-1载量（50～1 000拷贝/mL），并结合国内外试剂的检测限和定量限，将定量检测结果的低值区域定为20～1 000拷贝/mL。164例阳性样本中低值样本为31例。对2种试剂检测低值样本的结果进行相关性分析，结果显示相关性较好（r=0.823）。3 讨论本研究使用的DYSW-AUTO48全自动液体处理工作站采用纳米磁珠分离技术从样本中分离、纯化核酸。从加样开始，全自动完成样本裂解、核酸吸附、清洗、洗脱和试剂配置，无需人工干预，有效避免了人为因素的干扰，还能减少操作人员与临床样本的接触，降低生物安全风险，且成本较低、操作简便。本研究结果显示，国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂的检测符合率为100.00%，相关性良好（r=0.953），低值样本的相关性也较好（r=0.823），由此说明国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂检测结果的一致性良好。国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度为50 IU/mL（约30拷贝/mL），样本用量较少（400 μL），与厂商声明（检测下限为50 IU/ml）一致。由于部分HIV-1感染者在抗病毒治疗过程中会出现持续性低病毒血症，病毒载量为50～1 000拷贝/mL，与耐药发生、病毒学检测失败、持续性炎症、微生物移位、高死亡率等密切相关[10]，所以HIV检测试剂的高灵敏度性能具有重要的临床意义。综上所述，国产NEPG HIV-1试剂可以满足临床应用要求，检测成本较低，检测性能与进口HIV-1试剂相当，可用于HIV-1感染的早期诊断、疑难样本的辅助诊断及AIDS的病情监测等。参考文献[1]李繁，蒋岩，王天怡，等.某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估[J].中华疾病控制杂志，2013，17（7）：605-608.[2]王倩，杨志东，崔晨，等.免疫渗滤法检测血液及尿液HIV抗体的应用评价[J].微生物学杂志，2014，34（3）：71-73.[3]李书平，付雪梅，王乃红，等.第四代人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂特异性及灵敏度的比较及其意义[J].四川医学，2012，33（6）：1069-1071.[4]李梅，王静.某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估[J].检验医学与临床，2014，11（16）：2220-2221.[5]欧阳金鸣，韩晓旭，吉阳涛，等.三种不同技术原理的第4代HIV诊断试剂的临床检测性能比较研究[J].中华检验医学杂志，2013，36（10）：903-907.[6]李玉文.两种HIV抗体初筛试剂盒阳性率的比较分析[J].世界临床医学，2016，10（15）：7.[7]陈志忠，李结敏，廖扬勋，等.某国产NAT试剂盒应用于血液筛查的评价与应用[J].分子诊断与治疗杂志，2016，8（3）：192-195.[8]王述莲，戴立忠，陈曦，等.两种人类免疫缺陷病毒定量检测试剂的评价研究[J].中华医院感染学杂志，2014，24（22）：5461-5464.[9]HOLMES H，DAVIS C，HEATH A，et al.An international collaborative study to establish the 1st international standard for HIV-1 RNA for use in nucleic acid-based techniques[J].J Virol Methods，2001，92（2）：141-150.[10]RYSCAVAGE P，KELLY S，LI J Z，et and clinical management of persistence low-level viremia and very-low-level viremia in HIV-1-infected patients[J].Antimicrob Agents Chemother，2014，58（7）：3585-3598.

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