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国产全自动HIV-1 核酸定量检测试剂盒的性能评
作者:网站采编关键词:
摘要：获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的一种免疫缺陷性疾病[1]，治疗困难极大，极易引起多种并发症，
获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的一种免疫缺陷性疾病[1]，治疗困难极大，极易引起多种并发症，最终导致患者死亡[2]。因此，如何有效控制AIDS流行是目前医学界面临的难题。由于目前还没有能有效治疗AIDS及预防HIV感染的药物，因此现在只能通过早期筛查，查找传染源，从根本上切断HIV的传播途径，以有效避免AIDS的传播[3]。HIV抗体检测是诊断HIV感染的首选方法。HIV核酸检测可作为辅助检查手段使用，可用于HIV感染过程、病情进展及药物疗效的评估[4]。人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）核酸检测方法能够定量检测患者的HIV-1载量，准确反映体内病毒含量，对于疾病诊断及疗效评估具有重要意义[5]。虽然HIV-1核酸定量检测试剂早已用于临床，但大部分试剂为进口，价格昂贵，而且需要昂贵的仪器设备，导致检测费用居高不下，难以在基层医院及基层疾病控制中心推广[6-7]。因此，开发检测性能与进口试剂盒相当的国产试剂盒迫在眉睫[8]。目前，国内已有厂商自主研发了一些HIV-1核酸定量检测试剂盒，并用于临床检测，但准确性、敏感性尚不明确。本研究拟对国产全自动HIV核酸检测试剂的主要性能进行评估，并与进口试剂进行比对，探讨其临床应用的可行性。
1 材料和方法
1.1 样本
收集巴中市疾病预防控制中心2018年2—5月210例临床样本，其中男127例、女83例，年龄15～68岁。感染HIV-1的样本190例，非HIV-1感染样本20例。所有样本均采用乙二胺四乙酸二钾抗凝，1 000×g离心15 min，吸取上层血浆待测。所有样本均无重度溶血、变质及反复冻融等情况。
1.2 仪器与试剂
灵敏度/定量参考品（HIV-1 RNA为 4.04×105IU/mL）及参考品稀释液购自中国食品药品检定研究院（批号22）。DYSW-AUTO48全自动液体处理工作站及Line-Gene 9600 Plus实时荧光定量PCR检测系统均购自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。cobas AmpliPrep/cobas Taq-Man全自动核酸提取纯化及实时荧光定量PCR检测系统购自瑞士罗氏公司。待测试剂为NEPG全自动HIV-1核酸定量检测试剂盒（简称国产NEPG HIV-1试剂，批号），购自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。参比试剂为cobas AmpliPrep cobas TaqMan HIV-1 Test v2.0试剂盒（简称进口HIV-1试剂，批号Y06193），购自瑞士Roche公司。2种试剂盒的技术参数见表1。
表1 国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂的技术参数注：RT-PCR为逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction）
1.3 方法
1.3.1 准确性 将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释成低（5.0×102IU/mL）、中（5.0×103IU/mL）、高（5.0×104IU/mL）3个浓度，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3次，计算均值。将检测结果用lg函数转换成对数值。绝对偏差=测定结果均值的对数值-预期值的对数值。根据我国医药行业标准YY/T 1182—2010中的要求，靖龆允考段弦蟆? 1.3.2 灵敏度 将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释至200、100、50、25 IU/mL，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3次，计算可检出浓度。
1.3.3 对照试验 分别采用待测试剂和参比试剂双盲检测同份一血浆样本，评价2种试剂的符合率和一致性。待测试剂的定性结果判断：如果扩增曲线不呈现S型曲线或循环阈值（cycle threshold，Ct）为0，同时内标检测为阳性，报告为HIV-1 RNA阴性；除此之外，其他情况加上内标检测为阳性均判定为HIV-1 RNA阳性。
1.3.4 单位换算 根据基于核酸技术的HIV-1 RNA世界卫生组织第1代国际标准品（NIBSC 97/656）[9]，1拷贝/mL相当于1.67 IU/mL。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以±s表示，组间比较采用配对t检验。采用Kappa检验评价2种试剂定性结果的一致性。采用线性回归分析评价2种试剂定量结果的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 准确性分析
低、中、高浓度样本测定结果的绝对偏差分别为0.05、0.08、-0.06，均符合要求。见表2。
表2 国产NEPG HIV-1试剂的准确性
2.2 灵敏度分析
浓度为200、100、50 IU/mL的样本各检测3次，结果均为阳性。浓度为25 IU/mL的样本检测3次，有1次未检出。因此，国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度为50 IU/mL（约30 拷贝/mL）。见表3。
表3 国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度
文章来源：《自动化应用》 网址: http://www.zdhyyzz.cn/qikandaodu/2020/0727/453.html