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Copan WASP全自动微生物前处理系统性能及其临(2)
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摘要：1.2.3 菌落鉴定 所有平板培养24 h后进行拍摄和菌落观察，当肉眼可见菌落生长时，挑取单个菌落均匀涂布于微生物鉴定系统Vitek-MS专用靶板，然后采用该仪
1.2.3 菌落鉴定
所有平板培养24 h后进行拍摄和菌落观察，当肉眼可见菌落生长时，挑取单个菌落均匀涂布于微生物鉴定系统Vitek-MS专用靶板，然后采用该仪器对菌落进行鉴定，并记录最终鉴定结果。
1.2.4 判读标准
中段尿及痰标本分别依定量方式与半定量方式判读。中段尿标本结果判读标准：菌落生长个数≤100，记为菌落个数 1.0×103cfu/ml；菌落生长个数＞100，记为菌落个数＞1.0×105cfu/ml。痰标本结果判读标准：一区生长≤10个菌落，记为菌落个数≤1.0×104cfu/ml；一区生长＞10个菌落且二区生长≤5个菌落，记为菌落个数1.0×105cfu/ml；一区生长＞10个菌落、二区生长＞5个菌落且三区生长≤5个菌落，记为菌落个数1.0×106cfu/ml；一区生长＞10个菌落、二区生长＞5个菌落且三区生长＞5个菌落，记为菌落个数≥1.0×107cfu/ml。
1.2.5 性能评估
1.2.5.1 重现性
使用1 μl接种环连续接种1.0×104cfu/ml浓度的大肠埃希菌悬液于10个血琼脂平板，根据单个菌落计数评估仪器的重现性。
1.2.5.2 交叉污染
采用1.0×105cfu/ml浓度大肠埃希菌悬液和无菌生理盐水3个循环交替采样（即悬液—生理盐水—悬液—生理盐水—悬液—生理盐水），并按连续划线模式接种于血琼脂平板，同等孵育条件下（35℃普通孵箱）培养后观察结果，根据无菌生理盐水在平板上有无细菌生长评定仪器是否存在交叉污染。如果接种无菌生理盐水的平板上有细菌生长，且为前一个标本中的细菌则为交叉污染试验阳性；如均无细菌生长，则为交叉污染试验阴性。
1.2.5.3 方法学一致性
16种混合菌悬液经手工法与仪器法划线，每种一式3份，接种于血琼脂平板，培养后，通过对生长的菌种数量、菌落计数的比较分析2种方法是否存在差异性。
1.2.5.4 临床应用评价
分别比较临床50份痰标本150块平板（血琼脂平板、含万古霉素巧克力平板和麦康凯平板各50块）及50份中段尿标本100块平板（血琼脂平板和麦康凯平板各50块）仪器法与手工法两者间的菌种数量、菌落计数及其单个菌落数量差异性，评价Copan WASP全自动微生物前处理系统在临床应用的可行性。
1.2.6 统计学方法
分别收集16份混合菌悬液及50份痰标本、50份中段尿标本在培养平板中的分离菌种数量、菌落计数以及单个菌落的数量，保存平板菌落分离效果图像。单个菌落数量以±s表示。采用SPSS 18.0统计软件Mann-Whitney U非参数秩和检验分析仪器与手工划线接种方法在菌种数量、菌落计数的一致性，单个样本t检验分析10个连续接种平板的菌落计数均值与理论值的一致性，ANOVA单因素方差检验对2种不同方法的单个菌落数量进行比较，以P＜0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 重现性
以1 μl接种环连续接种1.0×104cfu/ml浓度的大肠埃希菌悬液于10个血琼脂平板，培养后，菌落计数为8.0×103～1.4×104cfu/ml[（1.）×104cfu/ml]，与理论值差异无统计学意义（P=0.322＞0.05），仪器具有高度的重现性。
2.2 交叉污染
采用1.0×105cfu/ml浓度大肠埃希菌悬液与无菌生理盐水交替采样并以连续划线模式接种于血平板，无菌生理盐水平板上均无细菌生长。
2.3 方法学一致性
16个不同浓度混合菌悬液接种48块平板（16×3）共 147（49×3）种菌株，培养后其回收的菌株和菌落计数结果分别如图1和表2、3所示。在48块平板（共含147种菌株）中，仪器法和手工法均可回收混合菌悬液中所有菌株的平板数量分别为17和22块（如图1所示），分离的菌株数量分别为114和106种，未能回收的菌株数量分别为33和41种（见表2）。仪器法与手工法差异无统计学意义（P=0.251＞0.05），但仪器法仍可回收更多的菌株，其菌落分离能力较手工法提高了7.55%。同时，16个不同浓度混合菌悬液在48块平板中生长的菌落计数亦无统计学差异（P=0.492＞0.05）。
图1 48块平板混合菌悬液2种接种方法不同菌种的平板回收情况
表2 混合菌悬液2种接种方法分离出不同种类菌株数量的未能回收情况（n=147）种注：0表示均可回收接种方法 0种 1种 2种 3种 4种 合计手工法 106 22 16 3 0 147仪器法 114 19 14 0 0 147
表3 混合菌悬液2种接种方法不同菌落计数的平板回收情况（n=48）块接方种法 ≤1.0×104cfu/ml 1.0×105cfu/ml 1.0×106cfu/ml ≥1.0×107cfu/ml合计手工法 3 7 22 16 48仪器法 2 5 23 18 48
文章来源：《自动化应用》 网址: http://www.zdhyyzz.cn/qikandaodu/2020/0727/456.html
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